Mario is Missing! è un videogame educativo: il giocatore guiderà Luigi in un viaggio intorno al mondo alla scoperta dei monumenti più famosi. In un viaggio simile non poteva mancare Roma. La città è rappresentata in maniera basilare, non ci sono molti elementi di richiamo alla realtà. Esplorando le vie è possibile scorgere in lontananza alcune rovine che ricordano i Fori Imperiali. A spasso per la capitale, Luigi dovrà trovare le monete della Fontana di Trevi, una lancia appartenuta a un gladiatore del Colosseo e parte della Cappella Sistina.